Primer maju dan mundur dipasang secara kovalen pada kepadatan tinggi ke slide dalam sel aliran. Rasio primer ke template pada dukungan menentukan kepadatan permukaan cluster yang diperkuat. Aliran sel diekspos ke reagen untuk ekstensi berbasis polimerase, dan priming terjadi sebagai ujung bebas / distal dari "jembatan" fragmen ligasi ke oligo komplementer di permukaan. Hasil denaturasi dan ekstensi yang berulang dalam amplifikasi lokal DNA fragmen di jutaan lokasi terpisah di seluruh permukaan sel aliran. Amplifikasi fase padat menghasilkan 100–200 juta kelompok template yang dipisahkan secara spasial, memberikan ujung bebas yang kemudian dihibridisasi dengan primer sekuensing universal untuk memulai reaksi sekuensing. Teknologi ini diajukan paten pada tahun 1997 dari Glaxo-Welcome's Geneva Biomedical Research Institute (GBRI), oleh Pascal Mayer, Eric Kawashima, dan Laurent Farinelli, dan dipresentasikan kepada publik untuk pertama kalinya pada tahun 1998. Pada tahun 1994 Adams dan Kron mengajukan paten pada operasi amplifikasi permukaan yang serupa, tetapi non-klonal, bernama "amplifikasi jembatan" yang diadaptasi untuk amplifikasi klonal pada tahun 1997 oleh Church dan Mitra.
Gambar 155A | Teknologi PacBio SMRT dan Oxford Nanopore dapat menggunakan DNA yang tidak diubah untuk menghadapi metilasi. | Nivretta Thatra / CC BY-SA (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/legalcode) | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:3rd_gen_Epigenetics.png) dari Wikimedia Commons
Penulis : Yavor Mendel
Komentar
Posting Komentar